2004年，王丽坤凭借出色的演技，导演徐克出演电视剧《七剑下天山》出道。
2005年，王丽坤出演了电视剧《河流如血》，其表演能力在这部戏中得到了很大的锻炼和提升，同时也得到了《河流如血》的编剧海岩肯定。
2006年，王丽坤出演电视剧《爱就爱了》中的护校女生张天玉。
2007年，王丽坤出演电视剧《家》 饰知识女性琴 。同年，出演了电视剧《五号特工组》。
2008年，王丽坤出演电视剧《无间有爱》，在剧中扮演的是一个苦命却又乐观坚强的女孩儿——“小雪”；同年，在电视剧《当铺》 中，王丽坤饰演的瑞芸香与吴流芳、尤光耀三个人是师兄妹，从小青梅竹马。
2009年，王丽坤在电视剧《加油优雅》（原名《傻女最牛》）饰康优雅。同年，出演了由柳云龙执导的电视剧《血色迷雾》，凭借悬念迭起、扑朔迷离的剧情，引来观众好评如潮，王丽坤饰演的郑晓聪也因此给大家留下了深刻的印象。 同年，王丽坤在古装大戏《美人心计》中一人出色分饰三个性格迥异的角色而获得业界和观众的一致好评。在电视剧《理发师》 中饰演富家千金宋嘉仪。
2010年，王丽坤和柳云龙再次牵手电视剧《告密者》。同时，她在谍战剧《迷案1937》（原名《上海迷案-1937》）中分饰一对性格迥异的双胞胎姐妹李梦露与李梦珠。
2011年，王丽坤出演电视剧《五号特工组2》。同年，在现代剧《婚巢》 中饰阳雪，按导演林黎胜要求素颜出镜。在抗战剧《连环套》 中，王丽坤饰演八路军女播音员马小茴，为了完成中共的一套惊险计划，与孟庆凡假扮夫妻，潜伏于日本人的警戒之下。
2012年，王丽坤在电视剧《北京青年》中饰演了精神病患者任知了让她人气剧增。
2013年，出演电视剧《零下三十八度》，在剧中，与于和伟饰演年定邦、常青夫妻。
2014年1月31日，其与韩庚、姚星彤合作主演的都市情感喜剧电影《前任攻略》上映，在片中则饰演罗茜。6月28日，其主演的都市爱情轻喜剧《爱的多米诺》在广东卫视播出，而她在剧中则饰演了绰号“黑桃A”、外冷内热的职场女性谢小诺。
2015年3月4日，在中央电视台元宵晚会上，表演舞蹈《国色天香》；4月16日，主演的电视剧《想明白了再结婚》在浙江卫视、深圳卫视联合播出；5月15日，与郑元畅、金范主演的电影《重生爱人》上映；6月12日，与刘恺威合作主演的电视剧《两生花》在浙江卫视、江苏卫视播出；11月，王丽坤出演《封神》，曝光角色海报。
2016年3月，主演根据网络小说《美人谋：妖后无双》改编的古装玄幻剧《天泪传奇之凤凰无双》，在剧中饰演女主角缪芊芊。9月14日，受邀出席“2017春夏纽约时装周”。随后，与高以翔合作主演浪漫爱情喜剧电影《情遇曼哈顿》，在片中饰演女主角白淇。之后，与杨洋、张天爱等合作主演古装玄幻武侠剧《武动乾坤》，在剧中饰演的九天太清宫宫主绫清竹。
2017年1月28日，其主演的古装魔幻喜剧电影《西游伏妖篇》上映，在片中则饰演蜘蛛精戚秦氏。
